DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
| ŠUMARSKI LIST 3-4/2003 str. 43 <-- 43 --> PDF |
D. Ballian: PROCJENA GENETIČKE VARIJABILNOSTI OBIČNE JELE (Abies alba Mill.) ANALIZOM Šumarski list br. 3-4, CXXV1I (2003). 135-151 2.3. Izoenzimi Istraživalo se 9 enzimskih sustava s ukupno 16 gen lokusa, odnosno 42 alela. Postupci maceracije, priprave gela, elektroforeze i bojenja gela bili su prilagođeni primijenjenim enzimskim sustavima (Vallejos, 1983; Cheliak i Pitel, 1984; Wendel i Wee den, 1989; Konnert, 1992, 1995, 1999; Thormann i Stephan, 1993; Hiissendorfer i sur., 1995,) (tablica 2). Tablica 2. Enzimski sustavi, E.C. referentni broj, broj lokusa i broj alela 2.4. Metoda priprave macerata Za maceraciju se rabi PVC ploča s polukuglastim udubljenjima u koja se stavi talka na vrhu manje laboratorijske žlice, i 60 ul ekstrakcijskog pufera (tablica 3) te 4 do 6 svježa pupova. Postupak maceracije izvodi se pomoću staklenog tučka (staklene mješalice). Nakon što se pupovi dobro izmaceriraju, u macerat se stavi po pet komadića filtarpapira da upiju macerat, a za- Tablica 3. Ekstrakcijski puferza pupove (Konnert, 1995) tim se papirići pohrane u male kasete i do uporabe smjeste u ledenicu na -70 °C. 2.5. Priprava gela Gel se pripravlja prema enzimskim sustavima iskorištenim u istraživanju receptima priloženima u tablici 4. Poslije priprave, odnosno kuhanja, gel se izlijeva u šablone određenih dimenzija, prema komorama za Tablica 4. Recepti za gel elektoforezu. Pri pripravi treba voditi i računa o gel puferu koji se stavlja u gel, a karakterističan je za svaki gel sustav (tablica 4 ). 2.6. Elektroforeza Pošto se pripravi gel i na njega u pripravljene ureze postave filtarpapiri, gel se stavi u komore. Prije postavljanja gela u komore stavi se elektrodni purer. Pošto se pripravi komora s gelom, pusti se jednosmjerna struja Tablica 5. Recepti za elektrodni pufer i gel pufer čija jačina (A) i napon (V) karakteriziraju svaki gel sustav. Trajanje elektroforeze karakteristično je za svaki enzimski sustav. |