DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
ŠUMARSKI LIST 7-8/2008 str. 22 <-- 22 --> PDF |
E. Hukić, A. Dounavi, D. Ballian: ANALIZA DNA HIBRIDNIH PLATANA (Platanus acerifolia /Aiton/ Willd.) Šumarski list br. 7–8, CXXXII (2008), 337-341 i 39 ciklusa na 94 °C 1 min, 62 °C 2 min, 72 °C 4 min, te završnom temperaturom 72 °C 7 min. Za razliku od ostalih istraživanih regija za umnožavanje 5S jezgrene regije bilo je potrebno povećati koncentraciju MgCl2 na 2,5 µM. Uvjeti umnožavanja bili su: 94 °C 1 min i 34 ciklusa 94 °C 1 min, 55 °C 1 min, 72 °C 1 min. Restrikcija umnoženih regija izvršena je s Pst I, HinfI, XbaI i Bam HI restrikcijskim enzimima (Bajrov i ć i sur. 2005), u termostatu na temperaturi od 35 °C, trajanju od 12 sati (preko noći). Pri naponu 100 V, kroz 4 do 5 sati, restrikcijski DNA fragmenati razdvojeni su u 1,5 % agaroznom gelu. Slika 3. Elektroforetsko razdvajanje restrikcijskih DNA fragmenata istraživanih regija na 1.5 % agaroznom gelu Figure 3 Electrophoretic spliting of DNA restrictions fragments of explored regions in 1,5 % agar gel REZULTATI ISTRAŽIVANJA Results of research Analizirano je ukupno 72 stabla platana, sa tri lokacije u Sarajevu: Ilidža, Dobrinja s jednom hibridnom skupinom, Nedžarići s prilično nehomogenim sastavom i deset stabala čiste istočnjačke platane podrijetlom sa Cipra, kao kontrolnom skupinom. Sve analizirane DNA sekvence imale su jednake dužine. Sve kloroplastne mikrosatelitne regije imale su RASPRAVA Četiri analizirane kloroplastne DNA mikrosatelitne oblasti, s jednakim dužinama sekvenci kod svih promatranih jedinki istočnjačke i javorolisne platane upućuju na to da su, analizirani dijelovi dominantni u procesima nasljeđivanja, a što je i poznato s obzirom da ovaj tip analiza determinira samo dominantnu regiju. Nepostojanje polimorfizma na analiziranim kloroplastnim DNA sekvencama P. acerifolia, i čiste vrste P. orientalis, očigledno upućuju na nasljeđivanje dominantnog gena od majčinske jedinike P. orientalis. ZAKLJUČAK Uporabom dvije metode kod istraživanja haplotipova četiri mikrosatelitne regije, trnT-trnL unutargenskog prostora, kao i 5S jezgrene DNA, nije dobijen željeni polimorfizam između jedinki ispitivanih skupina javorolisne platane. Može se zaključiti, da s navedenim kloroplasnim i jezgrinim početnicama nije moguće razlikovati hibridne jedinke od čiste vrste ( P. orientalis međusobno), kao ni hibridne jedinke međusobno, te na kraju da u samo po jedan alel sa sljedećim dužinama: 103 bp ccmp3, 92 bp ccmp6, 116 bp ccmp7 i 114 bp za ccmp10. Sve istraživane DNA regije bez obzira na uporabljenu metodu bile su u potpunosti jednake kod istraživanih jedinki. Discussion Treba istaći da uporabljene početnice u istraživanju platane nisu dovoljno informativne za pronalaženje značajne različitosti između analiziranih grupa, kao ni među jedinkama čiste platane i njegovih hibrida. Da bi se razlikovale i lakše odredile jedinke različitog podrijetla i pripadnosti hibridnih skupina, a koje uspijevaju u različitim ekološkim uvjetima, neophodno je pronaći nove informativnije sekvence koje bi dale raznolikost. - Conclusion ovom istraživanju izabrane DNA regije i metode ne odgovaraju zadanom cilju istraživanja. Kako bi se upoznali s genetičkom strukturom iste, i razotkrili polimorfizam između hibrida i čistih svojti, neophodno je nastaviti s daljnjim istraživanjima DNA sekvenci. |