DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
| ŠUMARSKI LIST 7-8/2008 str. 29 <-- 29 --> PDF |
B. Pintarić: MIKROPROPAGACIJA BIJELE TOPOLE (Populus alba L.) Površinska sterilizacija izvodi se tako da se vršni i bočni izbojci isijecaju, smiještaju u odgovarajuće flašice i tetiraju sredstvom za površinsku sterilizaciju. U tu svrhu najčešće se koristi 10 % otopina varikine (ili drugog komercijalnog izbjeljivača), koja sadrži 4–6 % Nahipoklorit. Sterilizacija se vrši u Erlenmajer posudama, ili drugim pogodnim staklenim flašicama, koje se prethodno začepe aluminijskom folijom i autoklaviraju. Površinska sterilizacija vrši se u laminarnom, specijalnom radnom prostoru sa sterilnim strujanjem zraka. U staklenu flašicu se pipetom doda kap detrdženta i 10 % otopine varikine. U ovoj fazi rada pipete ne moraju biti sterilne, a biljni materijal može se rukom ubaciti u flašicu sa sredstvom za površinsku sterilizaciju. Šumarski list br. 7–8, CXXXII (2008), 343-354 Lisni materijal potopljen u, ovako pripremljenu otopinu za površinsku sterilizaciju, treba intenzivno promućkati 2–10 minuta, dok je standardno vrijeme za sterilizaciju pupoljaka u trajanju od 20–30 minuta. Po isteku vremena namijenjenog površinskoj sterilizaciji otopina varikine se odlije, zatim se u flašicu nalijeva autoklavirana (sterilizirana) voda. Uobičajeno je da se sterilizirana voda promijeni bar 3 puta u trajanju od 5 minuta u svakoj posudi. Za uspješnost površinske sterilizacije izuzetno je važno da biljni materijal bude svjež. 3.2.2 Autoklaviranje instrumenata – Sterilization Instrumenti (skalpeli, pincete), filter papir i sta- Autoklaviranje je proces koji služi za sterilizaciju kleno laboratorijsko posuđe sterilizirano je u suhom destilirane vode i magenti s podlogama te zaraženih sterilizatoru, u trajanju od 1–3 sata na temperaturi od medija s izbojcima, a vrši se u autoklavu na temperatu180 °C. ri od 120 °C u trajanju od 30 min. 3.3. Priprema hranjive podloge Preparison of nutritious base Tablica 2. Sastav osnovne podloge za multiplikaciju U ovom radu je, kao osnovna podloga, korištena Table 2 Composition of primary base for multiplication modificirana podloga “Woody Plant” (WPM), osim Sastav Makroelementi NH4NO3 KNO3 CaCl2 x 2H20 MgSO4 x 7H2O KH2PO4 Mikroelementi MnSO4x H2O ZnSO4 x H2O H3BO3 Na2MoO4 x H2O CuSO4x 5 H2O Željezo Na2EDTA FeSO4x 7H2O Vitamini Thiamin HCl Nikotinska kiselina Pyridoxin-HCl Glicin Šećeri Myo-inositol Saharoza pH Agar Koncentracija (mg/l) makroelemenata koji su pripremljeni prema recepturi za Murashige i Skoog (MS) podlogu, što se vidi u ta1.650,00 blici 2. (Murashige i Skoog 1962.) 1.900,00 U podlozi za multiplikaciju korištene su dvije 440,00 različite kombinacije biljnih regulatora rasta: 0,5 mg/l 370,00 BA (M1) i 0,25 mg/l BA (M2); dok je podloga za za170,00 korjenjivanje zahtijevala pasažu biljaka na podlozi sa 0,1 mg/l IBA (Z) u trajanju od sedam dana, nakon čega 22,30 su presađene na medij bez hormona (BH) (Tablica 3). 8,60 6,20 Tablica 3. Koncentracije biljnih regulatora rasta u korište 0,25 0,25 Table 3 37,30 Podloga 27,80 Ml M2 1,00 Z 0,50 BH 0,50 2,00 100,00 30.000,00 5,7-6,2 9000 nim podlogama. Concentration of herbal plant growth regulators in used bases Sastav Osnovna podloga Osnovna podloga Osnovna podloga Osnovna podloga BAmg/l IBA mg/l 0,50 / 0,25 / / 0,10 / / 3.4. Rad u laminaru – Laminar work Laminar je komora kroz koju u horizontalnom mogli dospjeti do podloge ili uzorka u procesu inokusmjeru protiče sterilni zrak. Fini filteri ovoga aparata lacije. Laminar posjeduje UV lampe, koje se uključuju zadržavaju sve nepoželjne mikroorganizme, koji bi najmanje jedan sat prije početka rada. |