DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
ŠUMARSKI LIST 7-8/2008 str. 31 <-- 31 --> PDF |
B. Pintarić: MIKROPROPAGACIJA BIJELE TOPOLE (Populus alba L.) Šumarski list br. 7–8, CXXXII (2008), 343-354 Aklimatizacija se obično obavlja u plastenicima i staklenicima, a sadnica zasađena u kontejnerima štiti se plastičnom folijom 2 do 4 tjedna, odnosno dok ne krene formiranje novih listova. Što se tiče zemljišnog supstrata u koji se prenose biljke, ožiljene in vitro radi daljeg uzgoja, potrebno je omogućiti takvu mješavinu komponenti koja će dati supstratu sitnu mrvičastu strukturu i dobru aeraciju. U tu svrhu može se koristiti mješavina treseta i pijeska, a po potrebi i perlita. 3.6. Metode rada – Methods Ubičajeni rad odvija se kroz sljedeće faze mikropropagacije: 1. Prikupljanje materijala za mikropropagaciju, 2. Površinska sterilizacija, 3. Obrada biljnog materijala, 4. Uspostavljanje inicijalne kulture, 5. Multiplikacija izbojaka, 6. Izduživanje izbojaka, 7. Ožiljavanje izbojaka i 8. Aklimatizacija. Biljni materijal korišten u ovom eksperimentu potiče iz laboratorije Firenze Scienze e Tecnologie Ambientali Forestali i on je već bio uveden u kulturu, tako da su se u ovom radu izvodili samo postupci pod rednim brojevima 5–8, tj. multiplikacija izbojaka, izduži vanje izbojaka, ožiljavanje izbojaka i njihova aklimatizacija. Naime, biljke su u sterilnim (aseptičnim) uvjetima vađene iz Ewrlenmajer posuda i pomoću skalpela odstranjeni su oštećeni listovi i eventualni kalus. Potom je stabalce segmentirano na pojedinačne eksplantate s barem jednim nodijem, veličine 1–2 cm. Ovako secirani eksplantati su prebacivani na svježu podlogu za multiplikaciju. Prenos eksplantata na svježe podloge vršio se svakih 28–35 dana, što je, zapravo, i predstavljalo vrijeme supkultivacije (pasažiranja). Naime, usporavanje i zaustavljanje rasta eksplantata nastupa zbog osiromašenja hranjiva, sušenja agara, produkcije otrovnih bioproizvoda i smanjenja količine oksigena u unutrašnjosti posude, tako da je potrebno samo zdrava tkiva subkultivirati. Na podlogama za multiplikaciju nastojalo se vršiti umnožavanje izbojaka, tj. indukcija diferencijacije no vih izbojaka iz bočnih pupoljaka. Otprilike, nakon mjesec dana lako su se mogli uočiti i odstraniti novi bočni ogranci od matičnog stabalceta. U Erlenmajer posude, s podlogama za multiplikaciju je inokulirano u prosjeku po deset eksplantata. Dio eksplantata je “žrtvovan” u različitim vremenskim intervalima kako bi se izmjerile i dobile srednje vrijednosti svježe i suhe mase. Masa suhih uzoraka određivana je tako što su se uzorci prvo sušili četiri sata u termostatu na temperaturi od 105 °C. Masa svježih eksplantata, kao i masa suhih eksplantata određivana je na analitičkoj vazi. Po 3–5 izbojaka koji su postigli visinu od 3–4 cm prebacivani su u Erlenmajer posude s podlogom za zakorjenjivanje, a nakon sedam dana u Erlenmajer posude s podlogom bez hormona, što je na kraju rezultiralo pojavom korjenčića i kompletiranjem biljaka. Na ovaj način, dobivene biljčice sa razvijenim korijenovim sustavom su potom presađivane u zemljišni supstrat (sterilna smjesa zemlje i pijeska u omjeru 3:1) i prilagođivani na ex vivo uvjete života. Kulture su održavane u klima komori za rast biljaka, gdje su kontrolirani uvjeti temperature (25–28 °C), relativne vlažnosti zraka (60–80 %), intenziteta svjetlosti (3.000 lx) i fotoperiodizma (16 sati svjetlosti i 8 sati mraka). Zasađene biljčice u teglama bile su prvih sedam dana pokrivene staklenim čašama i redovno zaljevane sterilnom vodom. Tijekom ovih sedam dana čaše su “uklanjane”, u početku par minuta, a kasnije sve duže, dok se osmi dan čaše nisu potpuno uklonile i biljke počele zaljevati nesterilnom vodom. 4. REZULTATI RADA – The results of investigation 4.1. Faza multiplikacije – Multiplication phases Na osnovne podloge za multiplikaciju, modificirani Woody Plant Medium (WPM) uz dodatak 0,25 mg/l BA (M1) ili 0,5 mg/l BA (M2) presađeni su sterilni izbojci i njihovi dijelovi, različitih veličina. Izbojci su presađivani (pasažirani) suksesivno svakih 4–5 tjedana tijekom devet mjeseci izvođenja eksperimenta (od XI 2006. do VI 2007. godine). U ovom periodu zamijećeno je da se izbojci drukčije ponašaju na navedenim podlogama. Naime, zbog pro cjene potencijalne multiplikativnosti i stope multiplikacije date vrste potencijalni eksplantati razdvajani su s matičnog eksplantata i presađivani na novu podlogu. Tijekom prvih pet, od osam pasaža, bila je prisutna umjerena stopa multiplikacije na obje podloge, tako da je na podlozi M1 iznosila 5,36 po eksplantatu, a na podlozi M2 5,86 po eksplantatu. Međutim, u sljedećim pasažama došlo je do značajne promjene, te se broj novih izbojaka po eksplantatu na podlozi M1 smanjio na |